Все под контролем! Правильный способ использования внутреннего контрольного образца (ВКО)

Повышение надежности ПЦР-тест-систем достигается, в том числе, за счет использования внутреннего контрольного образца (ВКО). Для повышения точности и достоверности результатов ПЦР-исследования и их однозначного толкования в лабораторной диагностике, так же, как и в научных экспериментах, используют ряд контрольных экспериментов (реакций). Помимо стандартных положительной и отрицательной контрольных реакций, в ПЦР-диагностике используют внутренний контрольный образец (ВКО). Использование ВКО основано на возможности проведения в одной реакционной смеси нескольких практически независимых реакций амплификации для разных фрагментов ДНК (мультиплексная ПЦР). Так, например, для контроля за эффективностью ПЦР можно использовать одновременное протекание двух реакций амплификации в одной пробирке. В одной из таких реакций происходит накопление целевого фрагмента ДНК (или кДНК), а в другой амплифицируется специально добавленная в реакцию ДНК (обычно это фрагмент плазмидной ДНК). С помощью ВКО, добавляемого в образец перед этапом пробоподготовки (очистки ДНК от примесей), можно проконтролировать эффективность всех этапов анализа.

Специалисты знают, что очень важным этапом разработки ПЦР-тест-системы является правильная разработка и использование ВКО (внутреннего контрольного образца).

В случае ОТ-ПЦР (ПЦР с предшествующей ей обратной транскрипцией) ВКО – это специально сконструированный препарат РНК (экзогенный внутренний контроль), добавленный к каждому исследуемому образцу на этапе пробоподготовки биологического материала или изначально содержащийся в биологическом материале (эндогенный внутренний контроль), который проходит через все стадии ПЦР-анализа. На этапе детекции результат амплификации ВКО позволяет судить о качестве результата при проведении ПЦР-анализа в целом. Хотя использование эндогенного внутреннего контроля – тоже вариант, все же лучше всего использовать экзогенный внутренний контроль – ВКО на основе РНК. Экзогенный внутренний контроль добавляется непосредственно перед выделением РНК, проходит все стадии и, если в результате ПЦР-анализа мы видим сигнал от ВКО, это свидетельствует о том, что результат анализа можно принимать во внимание. Если же сигнала нет, то результат анализа недействителен.

Современная тест-система без внутреннего контрольного образца – это абсурд. Тем не менее почти половина (!) зарегистрированных в России тест-системы для детекции COVID-19 (всего выдано 24 РУ) до сих пор не имеют ни экзогенного, ни эндогенного ВКО. Конечно, ранее в условиях внезапной пандемии и нехватки времени, это можно было оправдать. Однако теперь, спустя месяцы, появились современные тест-системы с РНК в качестве ВКО и, естественно, предпочтительнее использовать их. Некоторые разработчики пошли еще дальше. Так, ученые Санкт-Петербургского НИИ им. Пастера приложили все усилия, чтобы разработать тест-систему по всем правилам и мировым стандартам ПЦР-диагностики. В новейшей запатентованной и зарегистрированной тест-системе COVID-19 AMP и ВКО, и ПКО представляют собой специальные конструкции армированной (защищенной) РНК — взвесь псевдовирусных частиц на основе фага MS2, содержащих фрагменты РНК SARS-CoV-2, что позволяет практически со 100% вероятностью исключить ложноотрицательные и ложноположительные результаты.

Технология создания РНК-препарата на основе фага MS2 весьма сложна. Если кратко, то это специфичный фрагмент РНК-вируса (в данном случае вируса SARS-CoV-2), который вставляется в последовательность РНК фага MS2. Получается фрагмент вируса SARS-CoV-2, клонированного в MS2 фаге. Фаг, в свою очередь, защищает РНК от разрушения при взаимодействии с клиническим образцом, тем самым получается препарат армированной (защищенной) РНК коронавирусной инфекции. Этот метод используется во всем мире при разработке тест-систем на основе ОТ-ПЦР, в том числе для диагностики РНК-содержащих вирусов, к коим относится и новый коронавирус SARS-CoV-2.

Итак, при выборе тест-системы для ПЦР-диагностики COVID-19, безусловно, обращайте внимание на протоколы и убедитесь, что:

  1. тест-система на COVID-19 содержит ВКО (внутренний контрольный образец) и ПКО (положительный контрольный образец)
  2. ВКО и ПКО являются препаратами армированной (защищенной) РНК (то есть сконструированы на основе фага MS2)

Ну, а если вы – потенциальный пациент, поинтересуйтесь в лаборатории, где вы собираетесь сдать анализ на ковидную инфекцию, какие реагенты использует лаборатория. Попросите инструкцию, прочитайте, не все так сложно. В конечном счете, спасение утопающих – дело рук самих утопающих. И это правило работает всегда!

Отреагировать
Лайк Любовь Ха-ха Ого Печаль Злюсь
332